ដំណោះស្រាយរកឃើញអង់ដូតូស៊ីនសម្រាប់ជីវឱសថ
ដំណោះស្រាយរកឃើញអង់ដូតូស៊ីនសម្រាប់ជីវឱសថ
បេតម៉ាតសាវតារគម្រោង និងបញ្ហាប្រឈមស្នូល
ជីវឱសថសំដៅលើថ្នាំដែលផលិតដោយមធ្យោបាយជីវបច្ចេកវិទ្យាដូចជាវិស្វកម្មហ្សែន និងវិស្វកម្មកោសិកា រួមទាំងអង្គបដិប្រាណម៉ូណូក្លូណាល់ ប្រូតេអ៊ីនផ្សំឡើងវិញ វ៉ាក់សាំង ផលិតផលព្យាបាលកោសិកា ផលិតផលឈាមជាដើម។ ថ្នាំទាំងនេះធ្វើសកម្មភាពដោយផ្ទាល់ទៅលើប្រព័ន្ធភាពស៊ាំរបស់មនុស្ស ឬប្រព័ន្ធឈាមរត់ ហើយភាពរសើបរបស់វាចំពោះការបំពុលអង់ដូតូស៊ីនគឺខ្ពស់ជាងថ្នាំគីមី។ សូម្បីតែកម្រិតអង់ដូតូស៊ីន 0.1 EU/kg ក៏អាចបណ្តាលឱ្យមានប្រតិកម្មមិនល្អធ្ងន់ធ្ងរដូចជាគ្រុនក្តៅ ឆក់អាណាហ្វីឡាក់ទិច និងសូម្បីតែខ្សោយសរីរាង្គច្រើនផងដែរ។
បើប្រៀបធៀបជាមួយទឹកឱសថ ការរកឃើញអង់ដូតូស៊ីននៃជីវឱសថប្រឈមមុខនឹងបញ្ហាប្រឈមស្នូលចំនួនបី៖ ① សមាសធាតុគំរូមានភាពស្មុគស្មាញ ដែលមានប្រូតេអ៊ីនកំហាប់ខ្ពស់ (ឧទាហរណ៍ កំហាប់អង្គបដិប្រាណម៉ូណូក្លូណាល់រហូតដល់ 100 មីលីក្រាម/មីលីលីត្រ) សារធាតុ surfactants (ឧទាហរណ៍ polysorbate 80) អំបិលសតិបណ្ដោះអាសន្ន (ឧទាហរណ៍ Tris ផូស្វាត) ជាដើម ដែលទំនងជាជ្រៀតជ្រែកជាមួយប្រតិកម្ម Limulus Amebocyte Lysate (LAL); ② ដែនកំណត់អង់ដូតូស៊ីនមានភាពខុសគ្នាយ៉ាងខ្លាំងក្នុងចំណោមពូជផ្សេងៗគ្នា (ឧទាហរណ៍ វ៉ាក់សាំងជាធម្មតា ≤ 10 EU/ដូស អង្គបដិប្រាណម៉ូណូក្លូណាល់ ≤ 0.5 EU/មីលីក្រាម) ដែលតម្រូវឱ្យមានវិធីសាស្ត្ររកឃើញភាពរសើបខ្ពស់។ ③ ជីវឱសថមួយចំនួន (ឧទាហរណ៍ ផលិតផលព្យាបាលកោសិកា) គឺមិនស្ថិតស្ថេរ និងមិនអាចទប់ទល់នឹងការព្យាបាលមុនដូចជាសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ និង pH ខ្លាំង ដែលបង្កើនការលំបាកក្នុងការលុបបំបាត់ការជ្រៀតជ្រែក។
ស្របតាមស្តង់ដារឱសថសាស្ត្រ ដំណោះស្រាយនេះផ្តល់នូវដំណោះស្រាយសម្រាប់ "ការផ្ទៀងផ្ទាត់វិធីសាស្ត្រ - ដំណើរការគំរូ - ការអនុវត្តការរកឃើញ - ការគ្រប់គ្រងគុណភាព" ដោយផ្អែកលើលក្ខណៈនៃជីវឱសថ ដើម្បីធានាបាននូវភាពត្រឹមត្រូវ ការអនុលោមតាម និងភាពជឿជាក់នៃលទ្ធផលនៃការរកឃើញ។
ទី ដែនកំណត់អង់ដូតូស៊ីន នៃជីវឱសថគួរតែត្រូវបានកំណត់ស្របតាមផ្លូវនៃការគ្រប់គ្រង កម្រិតថ្នាំ ការប្រើប្រាស់គ្លីនិកនៃថ្នាំ និងគោលការណ៍ណែនាំរបស់ក្រុមប្រឹក្សាអន្តរជាតិសម្រាប់ការសម្របសម្រួលតម្រូវការបច្ចេកទេសសម្រាប់ឱសថសម្រាប់ការប្រើប្រាស់របស់មនុស្ស (ICH) Q6B។ រូបមន្តគណនាស្នូលមានដូចខាងក្រោម៖
L = K/M
ដែល៖ L ជាដែនកំណត់អង់ដូតូស៊ីន (EU/មីលីលីត្រ ឬ EU/មីលីក្រាម)។ K ជាកម្រិតអង់ដូតូស៊ីនអតិបរមាដែលអាចទទួលយកបានក្នុងមួយគីឡូក្រាមនៃទម្ងន់ខ្លួនក្នុងមួយម៉ោង (សម្រាប់ការចាក់តាមសរសៃឈាមវ៉ែន K = 5 EU/គីឡូក្រាម·ម៉ោង; សម្រាប់ការចាក់តាមឆ្អឹងខ្នង K = 0.2 EU/គីឡូក្រាម·ម៉ោង); M ជាកម្រិតអតិបរមានៃថ្នាំដែលត្រូវបានចាក់ក្នុងមួយគីឡូក្រាមនៃទម្ងន់ខ្លួនក្នុងមួយម៉ោង (មីលីលីត្រ/គីឡូក្រាម·ម៉ោង ឬ មីលីក្រាម/គីឡូក្រាម·ម៉ោង)។
ដែនកំណត់អង់ដូតូស៊ីន និងតម្រូវការស្តង់ដារសម្រាប់ជីវឱសថទូទៅ
ប្រភេទថ្នាំ | ផលិតផលតំណាង | តម្រូវការកំណត់អង់ដូតូស៊ីន | ផ្លូវនៃការគ្រប់គ្រង |
អង្គបដិប្រាណម៉ូណូក្លូណាល់ | ផេមប្រូលីហ្សូម៉ាប | ≤ 0.5-2 EU/មីលីក្រាម | ការចាក់តាមសរសៃឈាមវ៉ែន, ការចាក់ក្រោមស្បែក |
ប្រូតេអ៊ីនផ្សំឡើងវិញ | អាំងស៊ុយលីនមនុស្សផ្សំឡើងវិញ អរម៉ូនលូតលាស់ | ≤ 0.01-0.1 សហភាពអឺរ៉ុប/សហរដ្ឋអាមេរិក | ការចាក់ចូលស្បែក, ការចាក់ចូលសរសៃឈាមវ៉ែន |
វ៉ាក់សាំង | វ៉ាក់សាំងកូវីដ-១៩ អសកម្ម និងវ៉ាក់សាំងរលាកថ្លើមប្រភេទបេ | ≤ 1-10 EU/ដូស | ការចាក់ចូលសាច់ដុំ, ការចាក់ចូលស្បែក |
ផលិតផលឈាម | អាល់ប៊ុយមីនសេរ៉ូមរបស់មនុស្ស អ៊ីមម៉ូណូក្លូប៊ូលីន | ≤ 0.5 EU/ml | ការចាក់តាមសរសៃឈាមវ៉ែន |
ផលិតផលព្យាបាលកោសិកា | ការរៀបចំកោសិកា CAR-T | ≤ 0.06 EU/គីឡូក្រាមនៃទម្ងន់ខ្លួនអ្នកជំងឺ | ការចាក់បញ្ចូលតាមសរសៃឈាមវ៉ែន |
ចំណាំ៖ «ដូស» សំដៅលើកម្រិតថ្នាំតែមួយដង ហើយ «U» សំដៅលើឯកតាសកម្មភាពជីវសាស្រ្ត។ ដែនកំណត់ជាក់លាក់គួរតែត្រូវបានបញ្ជាក់រួមផ្សំជាមួយនឹងស្លាកថ្នាំ និងតម្រូវការអនុម័តការចុះឈ្មោះ។
ការជ្រើសរើសវិធីសាស្ត្ររកឃើញ និងការវិភាគភាពឆបគ្នា
ទី អង់ដូតូស៊ីន ការរកឃើញ នៃជីវឱសថនៅតែពឹងផ្អែកជាចម្បងលើវិធីសាស្ត្រ gel-clot ដែលត្រូវបានអនុម័តដោយ pharmacopoeia វិធីសាស្ត្រ photometric (វិធីសាស្ត្រ turbidimetric/វិធីសាស្ត្រ chromogenic) ប៉ុន្តែវិធីសាស្ត្រដែលឆបគ្នាគួរតែត្រូវបានជ្រើសរើសទៅតាមលក្ខណៈគំរូ (ឧទាហរណ៍ កំហាប់ប្រូតេអ៊ីន កម្រិតនៃការជ្រៀតជ្រែក តម្រូវការភាពរសើប)។ ក្នុងប៉ុន្មានឆ្នាំថ្មីៗនេះ វិធីសាស្ត្រ recombinant factor C (rFC) ត្រូវបានប្រើប្រាស់កាន់តែខ្លាំងឡើងក្នុងការរកឃើញជីវឱសថដោយសារតែសមត្ថភាពប្រឆាំងនឹងការជ្រៀតជ្រែកខ្លាំង និងភាពជាក់លាក់ខ្ពស់។
ការប្រៀបធៀបភាពឆបគ្នានៃវិធីសាស្ត្រស្នូលបី
វិធីសាស្ត្ររកឃើញ | គោលការណ៍ស្នូល | គុណសម្បត្តិ | ដែនកំណត់ | ប្រភេទជីវឱសថដែលឆបគ្នា |
វិធីសាស្ត្រជែល-កំណកឈាម | ប្រតិកម្មរវាង LAL និង endotoxin បង្កើតជាជែល | ① ប្រតិបត្តិការសាមញ្ញ; ② មិនត្រូវការឧបករណ៍ពិសេសទេ | ① អសមត្ថភាពក្នុងការវាស់វែងបរិមាណបានត្រឹមត្រូវ អនុវត្តបានសម្រាប់តែការធ្វើតេស្តកំណត់ប៉ុណ្ណោះ។ | ការរកឃើញដែនកំណត់អង់ដូតូស៊ីននៃផលិតផលចុងក្រោយមុនពេលចេញផ្សាយ |
វិធីសាស្ត្រក្រូម៉ូហ្សែនិច | ការបំបែកដោយទឹកនៃស្រទាប់ខាងក្រោមក្រូម៉ូហ្សែនិចបង្កើតផលិតផលពណ៌ | ① មានសមត្ថភាពក្នុងការវាស់វែងបរិមាណ សម្រួលដល់ការវិភាគនិន្នាការ; ② មានសមត្ថភាពប្រឆាំងនឹងការជ្រៀតជ្រែកខ្លាំង | ① តម្លៃខ្ពស់នៃឧបករណ៍ និងសារធាតុប្រតិកម្ម | ការរកឃើញផលិតផលដូចជាអង្គបដិប្រាណម៉ូណូក្លូណាល់ និងប្រូតេអ៊ីនផ្សំឡើងវិញ (ដែលតម្រូវឱ្យមានការព្យាបាលជាមុនដើម្បីលុបបំបាត់ការជ្រៀតជ្រែក) |
វិធីសាស្ត្រ rFC | សារធាតុ Limulus ដែលបង្កើតឡើងវិញ ដែលមានប្រតិកម្មជាមួយអង់ដូតូស៊ីន | ① ភាពជាក់លាក់ខ្ពស់ (មានប្រតិកម្មតែជាមួយអង់ដូតូស៊ីនប៉ុណ្ណោះ មិនមែនជាមួយគ្លូកានទេ); ② មិនពឹងផ្អែកលើធនធានសត្វ | ① មិនទាន់ត្រូវបានទទួលស្គាល់ដោយឱសថសាស្ត្រមួយចំនួននៅឡើយទេ | សំណាកដែលអាចមានផ្ទុកសារធាតុ glucan ផលិតផលព្យាបាលកោសិកា (ភាពអាចធ្វើទៅបាននៃវិធីសាស្ត្រនេះត្រូវតែផ្ទៀងផ្ទាត់) |
ការជ្រើសរើសវិធីសាស្ត្ររកឃើញ
ជំហានទី 1: បញ្ជាក់ឱ្យច្បាស់អំពីគោលបំណងនៃការរកឃើញ
● សម្រាប់ "ការធ្វើតេស្តដែនកំណត់អនុលោមភាព"៖ ផ្តល់អាទិភាពដល់វិធីសាស្ត្រជែល-កំណកឈាម ឬវិធីសាស្ត្រក្រូម៉ូហ្សែនិច;
● សម្រាប់ "ការត្រួតពិនិត្យបរិមាណក្នុងដំណើរការផលិត"៖ ផ្តល់អាទិភាពដល់វិធីសាស្ត្រ chromogenic ឬវិធីសាស្ត្រ rFC;
● សម្រាប់ "គំរូដែលមានផ្ទុកគ្លូកាន"៖ ផ្តល់អាទិភាពដល់វិធីសាស្ត្រ rFC។
ជំហានទី 2: វាយតម្លៃកម្រិតនៃការជ្រៀតជ្រែកគំរូ
● ការជ្រៀតជ្រែកទាប (កំហាប់ប្រូតេអ៊ីន
● ការជ្រៀតជ្រែកកម្រិតមធ្យមទៅខ្ពស់ (កំហាប់ប្រូតេអ៊ីន 10-100 មីលីក្រាម/មីលីលីត្រ មានផ្ទុកសារធាតុ polysorbate): វិធីសាស្ត្រ Chromogenic (តម្រូវឱ្យមានការព្យាបាលជាមុន);
● ការជ្រៀតជ្រែកខ្ពស់បំផុត (កំហាប់ប្រូតេអ៊ីន > 100 មីលីក្រាម/មីលីលីត្រ ដែលមានសមាសធាតុស្មុគស្មាញ): វិធីសាស្ត្រ rFC។
ជំហានទី 3: ផ្គូផ្គងតម្រូវការភាពរសើប
● ដែនកំណត់ ≤ 0.1 EU/ml៖ ជ្រើសរើសវិធីសាស្ត្រក្រូម៉ូសូមេជីនិច (ដែនកំណត់រកឃើញ 0.001 EU/ml) ឬវិធីសាស្ត្រ rFC;
● ដែនកំណត់ > 0.1 EU/ml៖ វិធីសាស្ត្រកំណកជែលអាចបំពេញតាមតម្រូវការ។
លក្ខណៈពិសេស
-
វិធីសាស្រ្តព្យាបាលមុនទូទៅ និងសេណារីយ៉ូដែលអាចអនុវត្តបាន
វិធីសាស្ត្រព្យាបាលមុន
គោលការណ៍
ជំហានប្រតិបត្តិការ
ប្រភេទគំរូដែលអាចអនុវត្តបាន
ការប្រុងប្រយ័ត្នជាមុន
វិធីសាស្ត្រពនលាយ
កាត់បន្ថយកំហាប់នៃសារធាតុជ្រៀតជ្រែកទៅកម្រិតមិនជ្រៀតជ្រែក
ពនលាយសំណាកជាមួយទឹកសារធាតុ LAL ទៅនឹងកំហាប់ប្រូតេអ៊ីន
គំរូដែលមានកំហាប់ប្រូតេអ៊ីនមធ្យមទៅទាប (ឧទាហរណ៍ អាំងស៊ុយលីនផ្សំឡើងវិញ)
កត្តាពនលាយត្រូវការផ្ទៀងផ្ទាត់ (អត្រាស្តារឡើងវិញ 50% -200%)
វិធីសាស្ត្រទឹកភ្លៀងប្រូតេអ៊ីន
ធ្វើឱ្យប្រូតេអ៊ីនตกตะกอนជាមួយសារធាតុរំលាយអាស៊ីត/សរីរាង្គខ្លាំង
១. លាយសំណាកជាមួយអាស៊ីតទ្រីក្លរ៉ូអាសេទិក ១០% ក្នុងសមាមាត្រ ១:១ ហើយទុកវាចោលនៅសីតុណ្ហភាព ៤°C រយៈពេល ៣០ នាទី។ ២. បង្វិលម៉ាស៊ីនបង្វិលល្បឿន ១០,០០០ r/នាទី រយៈពេល ១០ នាទី។ ៣. យកសារធាតុរាវខាងលើសម្រាប់រកមើល។
អង្គបដិប្រាណម៉ូណូក្លូណាល់កំហាប់ខ្ពស់ ផលិតផលឈាម
ជៀសវាងការបង្វិលកណ្តាលច្រើនពេកដែលនាំឱ្យមានការធ្លាក់សារធាតុ endotoxin
វិធីសាស្ត្រចម្រោះដោយអ៊ុលត្រាហ្វ្លុយតេរីត
ភ្នាស Ultrafiltration រក្សាប្រូតេអ៊ីន ខណៈពេលដែល endotoxin ឆ្លងកាត់
១. បន្ថែមសំណាកទៅក្នុងបំពង់ centrifuge ultrafiltration ដែលគ្មាន endotoxin 30 kDa; ២. centrifuge ក្នុងល្បឿន 4,000 r/min រយៈពេល 15 នាទី។ ៣. ប្រមូលសារធាតុចម្រោះសម្រាប់រកឃើញ។
គំរូប្រូតេអ៊ីនម៉ាក្រូម៉ូលេគុល (ឧទាហរណ៍ អង្គបដិប្រាណម៉ូណូក្លូណាល់ដែលមានទម្ងន់ម៉ូលេគុល > 50 kDa)
លាងសម្អាតភ្នាស ultrafiltration ជាមួយទឹក LAL Reagent 3 ដងជាមុន
ការបន្ថែមសារធាតុរារាំងការជ្រៀតជ្រែក
សារធាតុរារាំងផ្សំជាមួយសារធាតុជ្រៀតជ្រែកដើម្បីបញ្ចេញអង់ដូតូស៊ីន
បន្ថែមសារធាតុទប់ស្កាត់ការជ្រៀតជ្រែក (ឧ. ប៉ូលីអេទីឡែនគ្លីកូល 6000) ទៅក្នុងប្រព័ន្ធប្រតិកម្មរហូតដល់កំហាប់ចុងក្រោយ 0.5% -1%
សំណាកដែលមានផ្ទុកសារធាតុ surfactants (ឧទាហរណ៍ វ៉ាក់សាំងដែលមានផ្ទុក Tween 80)
វាចាំបាច់ក្នុងការផ្ទៀងផ្ទាត់ថាសារធាតុទប់ស្កាត់មិនមានឥទ្ធិពលលើប្រតិកម្មរវាង LAL និង endotoxin ទេ។
វិធីសាស្ត្របន្សុទ្ធក្រូម៉ាតូក្រាហ្វី
យកប្រូតេអ៊ីនចេញដោយប្រើវិធីសាស្ត្រ affinity chromatography
ស្រូបយកអង់ដូតូស៊ីនជាមួយនឹងជួរឈរសម្ព័ន្ធភាពអង់ដូតូស៊ីន បញ្ចេញចោល ហើយបន្ទាប់មករកឃើញ
សំណាកដែលមានការជ្រៀតជ្រែកខ្ពស់ខ្លាំង (ឧទាហរណ៍ សារធាតុរាវលើសកោសិកា CAR-T)
តម្លៃខ្ពស់ ប្រើតែក្នុងដំណាក់កាលស្រាវជ្រាវ និងអភិវឌ្ឍន៍ប៉ុណ្ណោះ
-
ការធ្វើតេស្តផ្ទៀងផ្ទាត់ការជ្រៀតជ្រែក
ការផ្ទៀងផ្ទាត់ការជ្រៀតជ្រែកត្រូវតែអនុវត្តមុនពេលរកឃើញសារធាតុជីវឱសថទាំងអស់ ដើម្បីធានាបាននូវប្រសិទ្ធភាពនៃការព្យាបាលជាមុន។ ជំហានមានដូចខាងក្រោម៖
១. រៀបចំក្រុមគំរូ៖ គំរូសាកល្បងដោយមិនចាំបាច់ព្យាបាលជាមុន;
2. រៀបចំក្រុមដែលមានបន្លា៖ បន្ថែមអង់ដូតូស៊ីនដែលមានកំហាប់ដែលគេស្គាល់ (ឧទាហរណ៍ 0.1 EU/ml) ទៅក្នុងគំរូសាកល្បង។
៣. រកឃើញកំហាប់អង់ដូតូស៊ីននៃក្រុមទាំងពីររៀងៗខ្លួន ហើយគណនាអត្រានៃការស្តារឡើងវិញ៖ អត្រានៃការស្តារឡើងវិញ = (កំហាប់នៃក្រុមដែលមានការកើនឡើង - កំហាប់នៃក្រុមគំរូ) / កំហាប់នៃអង់ដូតូស៊ីនដែលបានបន្ថែមពីខាងក្រៅ × ១០០%
៤. ស្តង់ដារវិនិច្ឆ័យ៖ ប្រសិនបើអត្រានៃការងើបឡើងវិញស្ថិតនៅក្នុងចន្លោះពី 50% -200% វាបង្ហាញថាគ្មានការជ្រៀតជ្រែកទេ។ បើមិនដូច្នោះទេ វិធីសាស្ត្រព្យាបាលមុនត្រូវការធ្វើឱ្យប្រសើរឡើង។
(1) ការរៀបចំមុនពេលរកឃើញ
១. ការរៀបចំសំណាក៖ យកសំណាកអង្គបដិប្រាណម៉ូណូក្លូណាល់ 100 មីលីក្រាម/មីលីលីត្រ ហើយពនលាយវាទៅ 50 មីលីក្រាម/មីលីលីត្រជាមួយទឹកសារធាតុ LAL;
២. ការរៀបចំសារធាតុប្រតិកម្ម៖ សំណុំឧបករណ៍វិភាគអង់ដូតូស៊ីន BETMAT KCA (វិធីសាស្ត្រក្រូម៉ូហ្សែនិច Kinetic) ចំនួន ៣០០ តេស្ត/សំណុំ លេខកាតាឡុក KCA300TB។ សំណុំឧបករណ៍នេះរួមមាន៖ សារធាតុប្រតិកម្មក្រូម៉ូហ្សែនិច LAL, សារធាតុរំលាយសារធាតុឡើងវិញ, អង់ដូតូស៊ីនស្តង់ដារត្រួតពិនិត្យ, ទឹកសារធាតុប្រតិកម្ម LAL;
៣. ការរៀបចំឧបករណ៍៖ ① ឧបករណ៍អានមីក្រូផ្លាត Kinetic Incubating ELx808IUBET លេខកាតាឡុក៖ 808IUBET; ② បំពង់កែវពនលាយដែលគ្មានអង់ដូតូស៊ីន; ③ បំពង់បឺតដែលមានចុងគ្មានអង់ដូតូស៊ីន; ④ មីក្រូផ្លាត 96 រន្ធដែលគ្មានអង់ដូតូស៊ីន; ⑤ ឧបករណ៍លាយ Vortex; ⑥ ធ្នើរបំពង់សាកល្បង។
(2) ជំហានរកឃើញ
ការរៀបចំខ្សែកោងស្តង់ដារ
១. ពនលាយស្តង់ដារអង់ដូតូស៊ីនជាមួយទឹកសារធាតុរាវ LAL ទៅជាស៊េរីនៃកំហាប់ 0.001, 0.01, 0.1, 1 និង 10 EU/ml;
2. បន្ថែមសារធាតុស្តង់ដារ 100 μl ទៅក្នុងអណ្តូងនីមួយៗនៃចាន 96 អណ្តូង ដោយកំណត់អណ្តូងស្របគ្នាចំនួន 3 សម្រាប់កំហាប់នីមួយៗ។
៣. បន្ថែមសារធាតុប្រតិកម្ម LAL chromogenic ចំនួន ១០០ μl ទៅក្នុងអណ្តូងនីមួយៗ។
៤. ដាក់បន្ទះនៅក្នុងឧបករណ៍អានមីក្រូផ្លាត Incubating Microplate ហើយភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព ៣៧°C រយៈពេល ១២០ នាទី។ វាស់ការប្រែប្រួលនៃការស្រូបយកនៅរលកពន្លឺ ៤០៥ nm ដោយអាន OD៤០៥nm រៀងរាល់ ៣០ វិនាទីម្តង ហើយបង្កើតខ្សែកោងស្តង់ដារ (R² ≥ ០.៩៩)។
ការរកឃើញគំរូ
១. បន្ថែមសំណាកអង្គបដិប្រាណម៉ូណូក្លូណាល់ដែលពនលាយចំនួន ១០០ μl ទៅក្នុងអណ្តូងរកឃើញ (អណ្តូងស្របគ្នាចំនួន ២ + អណ្តូងត្រួតពិនិត្យទទេចំនួន ២ ត្រូវបានកំណត់);
2. ធ្វើជំហានភ្ញាស់ និងអានឡើងវិញនៃខ្សែកោងស្តង់ដារ។
៣. គណនាកំហាប់អង់ដូតូស៊ីននៃគំរូតាមខ្សែកោងស្តង់ដារ ហើយគុណនឹងកត្តាពនលាយដើម្បីទទួលបានកំហាប់ដើម។
ការផ្ទៀងផ្ទាត់ការជ្រៀតជ្រែក
១. អត្រានៃការជាសះស្បើយនៃក្រុមដែលមានបន្លា (គំរូ + អង់ដូតូស៊ីន ០.១ EU/ml) គឺ ៨៥% ដែលបំពេញតាមតម្រូវការពី ៥០% -២០០% ដូច្នេះវាត្រូវបានកំណត់ថាមិនមានការជ្រៀតជ្រែកឡើយ។
ការវិនិច្ឆ័យលទ្ធផល និងការរាយការណ៍
១. ស្តង់ដារវិនិច្ឆ័យ៖ ប្រសិនបើកំហាប់អង់ដូតូស៊ីននៃគំរូគឺ ≤ ដែនកំណត់ (ឧទាហរណ៍ អង្គបដិប្រាណម៉ូណូក្លូណាល ≤ 1 EU/មីលីក្រាម) ហើយការផ្ទៀងផ្ទាត់ការជ្រៀតជ្រែកមានលក្ខណៈសម្បត្តិគ្រប់គ្រាន់ គំរូត្រូវបានវិនិច្ឆ័យថា "មានលក្ខណៈសម្បត្តិគ្រប់គ្រាន់"។
2. ខ្លឹមសារស្នូលនៃរបាយការណ៍៖ គួរតែចង្អុលបង្ហាញ "វិធីសាស្ត្រព្យាបាលមុន" និង "លទ្ធផលផ្ទៀងផ្ទាត់ការជ្រៀតជ្រែក"។
(I) ចំណុចសំខាន់ៗនៃការគ្រប់គ្រងគុណភាពមន្ទីរពិសោធន៍ (QC)
ការគ្រប់គ្រងគុណភាពសារធាតុប្រតិកម្ម
1. សម្រាប់បាច់សារធាតុប្រតិកម្មថ្មីនីមួយៗ គួរតែធ្វើការ "ផ្ទៀងផ្ទាត់ភាពរសើប (វិធីសាស្ត្រជែលកំណកឈាម)" ឬ "ផ្ទៀងផ្ទាត់សុពលភាពខ្សែកោងស្តង់ដារ (វិធីសាស្ត្រហ្វូតូម៉ែត្រិច ឬវិធីសាស្ត្រ rFC)"៖ ប្រើស្តង់ដារដើម្បីរកឃើញភាពរសើបជាក់ស្តែងនៃសារធាតុប្រតិកម្ម ដែលគួរតែស្របនឹងសៀវភៅណែនាំ។
2. នៅពេលដែលគំរូអាចមានផ្ទុកសារធាតុជ្រៀតជ្រែកដូចជា glucan នោះ "ភាពជាក់លាក់" នៃសារធាតុប្រតិកម្មគួរតែត្រូវបានផ្ទៀងផ្ទាត់៖ បន្ថែមសារធាតុជ្រៀតជ្រែកដូចជា glucan ហើយបញ្ជាក់ថាមិនមានប្រតិកម្មវិជ្ជមានមិនពិត។
ការគ្រប់គ្រងដំណើរការប្រតិបត្តិការ
១. រៀបចំ "ការគ្រប់គ្រងវិជ្ជមាន (PC)" និង "ការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមាន (NC)"៖
● PC: ស្តង់ដារអង់ដូតូស៊ីន (ដើម្បីធានាបាននូវប្រសិទ្ធភាពនៃសារធាតុប្រតិកម្ម);
● NC: ទឹកសារធាតុរាវ LAL (ដើម្បីធានាថាគ្មានការចម្លងរោគឆ្លង);
2. គម្លាតទាក់ទងនៃសំណាកស្របគ្នាគួរតែ ≤ 10% (តឹងរ៉ឹងជាងស្តង់ដារ 15% សម្រាប់ទឹកឱសថ)។
ការក្រិតតាមខ្នាតឧបករណ៍
● ឧបករណ៍អានមីក្រូផ្លាតគួរតែត្រូវបានក្រិតតាមខ្នាតម្តងក្នុងមួយឆ្នាំ (ភាពត្រឹមត្រូវនៃរលកពន្លឺ និងកម្រិតស្រូបយក)។
● បំពង់វាស់គួរតែត្រូវបានក្រិតតាមខ្នាតម្តងក្នុងមួយភាគបួន (កំហុសបរិមាណ ≤ 5%)។
(II) ការគ្រប់គ្រងហានិភ័យដំណើរការផលិតកម្ម
១. ការគ្រប់គ្រងវត្ថុធាតុដើម៖ អង់ដូតូស៊ីននៃវត្ថុធាតុដើមដូចជាឧបករណ៍ផ្ទុកវប្បធម៌ សេរ៉ូម និងជួរឈរបន្សុទ្ធគួរតែត្រូវបានរកឃើញ ដោយមានដែនកំណត់ ≤ ០.០១ EU/ml;
2. ការគ្រប់គ្រងដំណើរការ៖ បន្ថែម "ជំហានដកយកអង់ដូតូស៊ីនចេញ" នៅក្នុងដំណើរការបន្សុទ្ធ (ឧទាហរណ៍ ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីផ្លាស់ប្តូរអ៊ីយ៉ុង ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីភាពស្និទ្ធស្នាលស្រូបយកអង់ដូតូស៊ីន);
៣. ការគ្រប់គ្រងបរិស្ថាន៖ អង់ដូតូស៊ីននៅក្នុងខ្យល់នៃតំបន់ថ្នាក់ A (តំបន់បំពេញ) នៃសិក្ខាសាលាផលិតកម្មគួរតែមាន ≤ ០,០៣ EU/ម៉ែត្រគូប ហើយការត្រួតពិនិត្យជាប្រចាំគួរតែត្រូវបានធ្វើឡើង។
បញ្ហាទូទៅ | មូលហេតុចម្បង | ដំណោះស្រាយ |
ភាពលីនេអ៊ែរមិនល្អនៃខ្សែកោងស្តង់ដារ | ការលាយមិនគ្រប់គ្រាន់នៅពេលពនលាយស្តង់ដារអង់ដូតូស៊ីន | នៅពេលពនលាយស្តង់ដារការងាររបស់អង់ដូតូស៊ីន សូមប្រើម៉ាស៊ីនលាយវ៉ូតិចដើម្បីលាយលើសពី 30 វិនាទីនៅជំហាននីមួយៗ។ |
ការធ្វើម្តងទៀតមិនបានល្អនៃលទ្ធផលរកឃើញ | គំរូមិនស្មើគ្នា (អង់ដូតូស៊ីនស្រូបលើផ្ទៃប្រូតេអ៊ីន) | មុនពេលរកឃើញ សូមភ្ញាស់សំណាកក្នុងអាងងូតទឹកសីតុណ្ហភាព 60°C រយៈពេល 10 នាទី ហើយលាយបញ្ចូលគ្នាជារង្វង់ (ជៀសវាងការធ្វើឱ្យខូចអង់ដូតូស៊ីនក្នុងសីតុណ្ហភាពខ្ពស់) |
អត្រានៃការងើបឡើងវិញទាបជាង 50% | ការបរាជ័យក្នុងការលុបបំបាត់ការជ្រៀតជ្រែក | ពនលាយគំរូបន្ថែមទៀត ហើយប្រើសារធាតុប្រតិកម្មក្រូម៉ូហ្សែនិចដែលមានភាពរសើបខ្ពស់ ឬប្រើប្រាស់វិធីសាស្ត្រព្យាបាលមុនដែលរួមបញ្ចូលគ្នានូវការពនលាយ និងកំដៅគំរូ។ |
ការបង្កើនប្រសិទ្ធភាពគម្រោង និងនិន្នាការនាពេលអនាគត
- ការរួមបញ្ចូលវិធីសាស្រ្ត
ផ្សំ "វិធីសាស្ត្រក្រូម៉ូហ្សែនិចចលនាសម្រាប់ការត្រួតពិនិត្យក្នុងដំណើរការផលិតកម្ម" ជាមួយ "វិធីសាស្ត្រកំណកជែលសម្រាប់ការរកឃើញការបញ្ចេញផលិតផលចុងក្រោយ" ដើម្បីធ្វើឲ្យមានតុល្យភាពប្រសិទ្ធភាព និងការអនុលោមតាមច្បាប់;
- ការធ្វើឱ្យមានប្រជាប្រិយភាពនៃវិធីសាស្រ្តដែលមិនមានប្រភពមកពីសត្វ
២. អនុម័តវិធីសាស្ត្រ rFC ដើម្បីជំនួសវិធីសាស្ត្រ LAL បែបប្រពៃណី ស្របតាមតម្រូវការការពារសត្វ និងការអភិវឌ្ឍប្រកបដោយចីរភាព។
តាមរយៈការរចនាបីស្រទាប់នៃ "ភាពឆបគ្នានៃវិធីសាស្ត្រ - ការលុបបំបាត់ការជ្រៀតជ្រែក - ការគ្រប់គ្រងគុណភាពយ៉ាងតឹងរ៉ឹង" ដំណោះស្រាយនេះដោះស្រាយជាពិសេសនូវចំណុចឈឺចាប់ស្នូលនៃការរកឃើញអង់ដូតូស៊ីននៅក្នុងជីវឱសថ ហើយអាចបំពេញតម្រូវការរកឃើញពេញមួយវដ្តជីវិតទាំងមូលចាប់ពីការស្រាវជ្រាវ និងអភិវឌ្ឍន៍ ការផលិតរហូតដល់ការចុះឈ្មោះ ដោយផ្តល់នូវការធានាគុណភាពសំខាន់ៗសម្រាប់សុវត្ថិភាពនៃជីវឱសថ។